重組 - 熱穩(wěn)定
E-TSAGS
貨號:AS000007
EC: 3.2.1.20
同義詞: α-葡萄糖苷酶;α-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶
CAZy Family: GH13
CAS: 9001-42-7
特性
電泳純度:
- SDS 凝膠電泳上的單條帶(MW ~ 66,000)
- 等電聚焦上的單一主帶(pI ~ 6.7)
酶活檢測方法:
定義酶活活性:在pH 6.5和40°C下,在405 nm下每分鐘從4-硝基苯基 α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)產生1μmol對硝基苯酚(pNP)所需的酶量為一個酶活力單位。pNP在波長405nm處有吸收峰,采用酶標儀在405nm處測定的吸光度,以此計算產物pNP的含量。
以pNP為標準溶液繪制標準曲線,梯度稀釋:用0.1mol/L PBS(pH 6.5)配置250 umol/L對硝基苯酚,分別稀釋成200, 150,100,50,25,5,0 umol/L,取各梯度標準液100ul,再加入顯色液100ul 1mol/L Na2CO3溶液,測定OD405的,繪制酶活標準曲線。
樣品酶活檢測:取20ul 5mM pNPG和60ul 0.1mol/L PBS(pH 6.5)及適度稀釋的酶液20ul,混勻后在40℃水浴鍋中反應10min后立即加入100ul 1mol/L Na2CO3溶液使反應終止并顯色,然后檢測OD405。
酶活力(U/mL)= C × 50 × N/10
C——測定酶液吸光值對應曲線上的pNP濃度;
50——將20ul稀釋酶液中的活性折算為1ml酶液時的活性;
N——原酶液稀釋倍數;
10——反應時間。
|