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兔子單克隆抗體制備

時間：2021-11-04 作者：市場部 文章來源： 瀏覽：1540

單克隆抗體制備限于技術(shù)保護的原因，目前，兔單克隆雜交瘤細胞制備技術(shù)被一家公司壟斷，所以我們無法通過像類似制備小鼠單克隆抗體那樣，制備兔源雜交瘤細胞獲得兔源單克隆抗體。為此，公司在一大批免疫學與基因工程學專家的幫助下，先后建立了兩套兔源單克隆抗體制備方案。這兩種方案均不依賴于兔源骨髓瘤細胞，但是其抗體的種源特性毫無疑問是兔源，在保留兔源單克隆抗體優(yōu)勢的同時，大大壓縮試驗周期，提高試驗成功率。

方案一噬菌體展示技術(shù)

M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫展示系統(tǒng)，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達，使之參與噬菌體組裝，并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫，針對特定靶分子進行3-5 輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的DNA序列信息。

艾柏森（北京）生物科技有限公司目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫，并提供靈活高效的篩選服務(wù)。在此技術(shù)儲備的基礎(chǔ)上，我們提供的兔源單克隆抗體噬菌體展示方案，可高效靈活的根據(jù)客戶需要大規(guī)模探測高親和力抗體，同時結(jié)合公司*的兔源Fc表達質(zhì)粒，與高效真核表達系統(tǒng)，使得我們的抗體擁有極高的表達效率。

方案二重組抗體制備技術(shù)

艾柏森（北京）生物科技開發(fā)出一種革命性的單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)，使單克隆抗體的生產(chǎn)不sha害動物，不依賴雜交瘤。該技術(shù)通過分離培養(yǎng)B細胞，并利用ELISA、Western Blot、IHC（Immunohistochemistry）等方法篩選出抗原特異性B細胞。再通過分子克隆的手段重組表達完整的抗體分子。該技術(shù)可用于開發(fā)高品質(zhì)的兔子和小鼠等不同物種的單克隆抗體。

其主要依托技術(shù)有：

高效的B細胞體外培養(yǎng)體系

高通量B細胞篩選技術(shù)

穩(wěn)定的VH和VL抗體分子表達體系

高通量的抗體分子測序平臺

兔子單克隆抗體制備服務(wù)項目

服務(wù)項目

(Service Items)

周期（周）

Time(weeks)

方案一：

噬菌體展示技術(shù)

（Phage Display）

方案二：

異源表達重組技術(shù)

(Heterogeneous Recombination)

多肽

Peptide

小分子

Molecular

磷酸基/甲基/乙基化多肽

Phosphate/Methyl/

acetyl-specific

目前只有針對部分腫瘤相關(guān)通路熱點分子的抗原，詳情請與公司技術(shù)人員溝通

多肽設(shè)計與合成

Peptide design & synthesis

多肽設(shè)計

Peptide design

~2

可選，免費

多肽合成

Peptide synthesis

√



√



小分子或多肽偶聯(lián)

conjugation

√


√


√


免疫階段

Immunization

免疫2只兔子

Immunized 2 rabbits

~8

√

√

√

√

ELISA檢測

Elisa detection

√

√

√

√

cDNA制備

cDNA preparation

逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA文庫

prepare cDNA library by RT-PCR

~1

√

√

√

√

cDNA 文庫質(zhì)檢

cDNA library QC check

√

√

√

√

構(gòu)建Fab抗體庫

Fab library   construction

VH與VL基因獲得

obtained VH and VL   genes

10~15

√

√

√

√

構(gòu)建初級抗體庫

primary antibody   library construction

√

√

√

√

構(gòu)建Fab抗體庫

Fab library   construction

√

√

√

√

噬菌體篩選

phage screening

噬菌體顆粒包裝

phage particles package

10~15

√

√

√


磁珠親和篩選

magnetic beads affinity screening

√

√

√


陽性克隆回收基因測序

Recover positive clones and DNA sequencing

√

√

√


抗體表達

Antibody expression

特異性雙鏈基因合成與Fc基因橋接

synthetic of target   phage gene and Fc gene

~5

√

√

√

√

構(gòu)建真核表達載體

Eukaryotic system   expression plasmids construction

√

√

√

√

真核表達

Eukaryotic system   expression

√

√

√


穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系構(gòu)建

Stably transfected   cell line construction




√

純化與檢測

Purification and detection

標簽純化

Tag affinity purification

~1

√

√

√

√

特異性親和純化

Antigen specific affinity purification

√

√

√

√

總周期（月）

Total lead   time(months)

7~9

3~5













注：

單克隆抗體制備價格面議；

請慎重考慮周期事宜，以上時間僅為理想條件下短周期；

為了縮短試驗周期建議考慮自行提供抗原直接免疫做起；

免疫環(huán)節(jié)設(shè)立驗收節(jié)點，效價合格，取脾臟，效價不合格，終止實驗；

抗體庫構(gòu)建步驟啟動之前，至少支付此步驟的50%全款；完成項目，支付尾款。

 

單克隆抗體制備服務(wù)組合:

客戶：提供抗原蛋白信息

制備流程：

1）抗原制備質(zhì)粒表達蛋白純化多肽設(shè)計合成及交聯(lián)；

2）免疫：*免疫兔子2只，失敗后又加免3只；

3）ELISA/Western-blot試驗監(jiān)控兔子血清中的抗體效價和特異性，根據(jù)ELISA和WB檢測，篩選兔子；

4）cDNA文庫制備與噬菌體載體構(gòu)建；

5）磁珠鏈霉素親和篩選；

6）陽性克隆測序與基因合成橋接；

7）真核表達質(zhì)粒構(gòu)建；

8）穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞構(gòu)建；

9）試表達鑒定與結(jié)果交付；

交付產(chǎn)品（每種抗原，所有兔子總共的）

1）1株針對免疫原特異性的單克隆雜交瘤細胞株

2）1ml（濃度約0.1~1mg/ml）純化的抗體，Elisa效價應(yīng)至少1:200以上；

制備時間：3~6個月

兔子單克隆抗體制備成功案例：

Publication: Plos One

IF：3.05

Title：TSC1/2 signaling complex is essential for peripheral na?ve CD8+ T   cell survival and homeostasis in mice.

Name：anti- Tuberin antibody

Species: Mouse

Type：Rabbit Recombination Monoclonal antibody

 

兔子單克隆抗體制備.1.jpg

兔子單克隆抗體制備.2.png

Immunohistochemical analysis ofparaffin-embedded mouse placenta tissue using anti-Tuberin antibody. Counterstained with hematoxylin.

Recommended constration: 1:200