miRNA的檢測
Real-time PCR方法克服了由于miRNA分子太短(~22 nt)帶來的定量最大難題而引入靶向特異性的反轉(zhuǎn)錄引物,該RT引物可以與成熟miRNA結(jié)合,形成反轉(zhuǎn)錄引物/成熟miRNA復合物,并在miRNA的5’末端延伸。這樣就得到一個較長的反轉(zhuǎn)錄擴增因子,為進一步做實時定量PCR提供了符合要求的摸板。
檢測流程與原理:
提供樣品:
請?zhí)峁┬迈r且足量的樣本,組織>100~200 mg,RNA模板/DNA模板>5 μg;
提供信息:
待測miRNA名稱;詳細的背景資料:樣本來源、豐度、相關文獻等;
?交付成品:
設計合成的熒光標記引物探針等實驗材料;
?交付報告:
詳細的實驗步驟、完整的實驗報告、標準曲線、擴增曲線、溶解曲線、軟件分析結(jié)果。