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基因組步移
基因步移TAIL-PCR法
TAIL-PCR（thermal asymmetric interlaced PCR），即交錯式熱不對稱PCR，該技術根據(jù)已知 DNA 序列，分別設計三條同向且退火溫度較高的特異性引物（SP Primer），與經(jīng)過獨特設計的退火溫度較低的兼并引物（可以設計多條，AP1、AP2、AP3……）， 進行熱不對稱 PCR 反應。通常情況下，其中至少有一種兼并引物可以與特異性引物之間利用退火溫度的差異進行熱不對稱 PCR 反應，一般通過三次巢式 PCR 反應即可獲取已知序列的側翼序列。如果一次實驗獲取的長度不能滿足實驗要求時，還可以根據(jù)第一次步移獲取的序列信息，繼續(xù)進行側翼序列獲取。
基因步移內切酶法
內切酶法則是將基因組DNA通過酶切之后，在DNA片段兩端加上接頭，利用接頭引物（可以設計多條，AP1、AP2、AP3……）與根據(jù)已知DNA序列所設計的2~3條特異性引物（可以設計多條，GSP1、2、3……）進行2~3輪巢式PCR以獲取已知序列的側翼序列。如果一次實驗獲取的長度不能滿足實驗要求時，還可以根據(jù)第一次步移獲取的序列信息，繼續(xù)進行側翼序列獲取。
?交付成品：
不少于1μg的包含目的基因的質粒一份；含上述質粒的甘油菌株一份；測序引物； 如產(chǎn)生克隆測序，提供測序用的質粒；
?交付報告：
實驗報告、PCR 產(chǎn)物照片、測序結果。
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