RNA的提取
從新鮮組織、血液、細(xì)胞、細(xì)菌等多種材料中提取RNA,不同種類(lèi)的材料中可獲得的RNA量不同,因而差異也比較大,一般材料的RNA得率如下表:
材料種類(lèi) |
樣品要求 |
超始量 |
產(chǎn)物量 |
血液 |
新鮮血液及抗凝劑處理的全血 |
250μL |
0.1~0.3 μg |
培養(yǎng)細(xì)胞 |
離心收集的細(xì)胞 |
1×106 |
10μg左右 |
動(dòng)物組織 |
一般材料 |
100 mg |
5~10μg |
植物 |
一般材料 |
100 mg |
5~10μg |
其他 |
具體材料需進(jìn)行具體條件摸索 |
客戶(hù)提供 |
由樣品量決定 |
客戶(hù)提供:
細(xì)胞樣品需要新鮮培養(yǎng);動(dòng)物組織、植物組織等樣品取樣后需液氮速凍;
用于提取RNA的血液樣品最好使用肝素抗凝,而不要使用EDTA,因?yàn)镋DTA會(huì)螯合二價(jià)離子(Mg2+),而影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如反轉(zhuǎn)錄、PCR等);可在4℃下可保存一周,-20℃下可保存1個(gè)月;
取樣所使用的手套、容器等需經(jīng)RNase free處理,待提取樣品最好使用干冰運(yùn)輸。
交付成品:
實(shí)驗(yàn)獲取的RNA樣品;
交付報(bào)告:
完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)
通過(guò)RT-PCR,RNA被逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA,再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增。RT-PCR的關(guān)鍵步驟是在RNA的反轉(zhuǎn)錄,要求保證RNA模版的完整性,并去除不含DNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。常用的反轉(zhuǎn)錄酶有兩種,即鳥(niǎo)類(lèi)成髓細(xì)胞性白細(xì)胞病毒(AMV)反轉(zhuǎn)錄酶和莫羅尼鼠類(lèi)白血病病毒(MMLV)反轉(zhuǎn)錄酶。
客戶(hù)提供:
模板RNA或樣品(本公司可代為提取RNA)等;
交付成品:
實(shí)驗(yàn)獲取的cDNA樣品;PCR擴(kuò)增產(chǎn)物樣品;
交付報(bào)告:
完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
序號(hào) | 最新資訊 | 瀏覽次數(shù) | 作者 | 發(fā)布時(shí)間 |
1 | 基因調(diào)取 | 3614 | 市場(chǎng)部 | 2017-01-19 |
2 | 基因組步移 | 3754 | 市場(chǎng)部 | 2017-01-19 |
3 | 基因克隆 | 8494 | 市場(chǎng)部 | 2017-01-19 |
4 | 化學(xué)合成miRNA | 2546 | 市場(chǎng)部 | 2017-01-19 |
5 | 熒光定量PCR | 3683 | 市場(chǎng)部 | 2017-01-19 |
6 | miRNA的檢測(cè) | 3749 | 市場(chǎng)部 | 2017-01-19 |