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RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

時(shí)間:2009-05-18 作者:市場(chǎng)部 文章來(lái)源:市場(chǎng)部 瀏覽:8343


RNA的提取


從新鮮組織、血液、細(xì)胞、細(xì)菌等多種材料中提取RNA,不同種類(lèi)的材料中可獲得的RNA量不同,因而差異也比較大,一般材料的RNA得率如下表:


材料種類(lèi)

樣品要求

超始量

產(chǎn)物量

血液 

新鮮血液及抗凝劑處理的全血

250μL

0.1~0.3 μg

培養(yǎng)細(xì)胞

離心收集的細(xì)胞

1×106

10μg左右

動(dòng)物組織

一般材料

100 mg

5~10μg

植物

一般材料

100 mg

5~10μg

其他

具體材料需進(jìn)行具體條件摸索

客戶(hù)提供

由樣品量決定


客戶(hù)提供:

細(xì)胞樣品需要新鮮培養(yǎng);動(dòng)物組織、植物組織等樣品取樣后需液氮速凍;

用于提取RNA的血液樣品最好使用肝素抗凝,而不要使用EDTA,因?yàn)镋DTA會(huì)螯合二價(jià)離子(Mg2+),而影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如反轉(zhuǎn)錄、PCR等);可在4℃下可保存一周,-20℃下可保存1個(gè)月;

取樣所使用的手套、容器等需經(jīng)RNase free處理,待提取樣品最好使用干冰運(yùn)輸。

交付成品:

實(shí)驗(yàn)獲取的RNA樣品;

交付報(bào)告:

完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。


反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)

通過(guò)RT-PCR,RNA被逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA,再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增。RT-PCR的關(guān)鍵步驟是在RNA的反轉(zhuǎn)錄,要求保證RNA模版的完整性,并去除不含DNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。常用的反轉(zhuǎn)錄酶有兩種,即鳥(niǎo)類(lèi)成髓細(xì)胞性白細(xì)胞病毒(AMV)反轉(zhuǎn)錄酶和莫羅尼鼠類(lèi)白血病病毒(MMLV)反轉(zhuǎn)錄酶。

客戶(hù)提供:

模板RNA或樣品(本公司可代為提取RNA)等;

交付成品:

實(shí)驗(yàn)獲取的cDNA樣品;PCR擴(kuò)增產(chǎn)物樣品;

交付報(bào)告:

完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。


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5 熒光定量PCR 3683 市場(chǎng)部 2017-01-19
6 miRNA的檢測(cè) 3749 市場(chǎng)部 2017-01-19