一、什么是轉染?
從廣義上講,轉染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導入細胞的過程。采用各種化學、生物學或物理方法導入外源性核酸會改變細胞的特性,從而實現細胞基因功能和蛋白質表達研究。轉染后,導入的核酸可以瞬時性地存在于細胞內,只表達一段時間且不會復制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內,隨著宿主基因組的復制而復制,各種基因輸送系統(tǒng)采用的術語與該領域的技術進展步調一致,并進一步區(qū)分不同的方法和細胞類型。
1、轉染
轉染通常是指將核酸輸送到真核細胞,或者更明確地說是輸送到動物細胞內。術語轉染一般用來表示原核生物感染病毒或噬菌體中病毒核酸的攝取,導致成熟病毒顆粒的感染和生成。但該術語現在的含義包括將外源性核酸人工導入細胞內。
2、轉化
轉化通常用來描述細菌、非動物真核細胞和植物細胞中非病毒DNA的轉移。但是,轉化還表示引起動物細胞表型發(fā)生性改變的特定事件或一系列事件,暗示遺傳不穩(wěn)定性及發(fā)展為癌癥狀態(tài)。盡管從這個意義上講,轉化可以源于轉化病毒的感染或基因轉染,也可以同時發(fā)生或在外來刺激物(如離子輻射或化學致突變源)刺激下產生。因此,在描述外源性遺傳物質導入時,應避免將該術語用于動物細胞。
3、轉導
轉導用于描述病毒介導的DNA轉移。但是,術語轉染也可以表示細胞的病毒核酸(從真核細胞病毒或噬菌體中分離)感染。
轉染的兩個主要目的是生成重組蛋白,或特異性地提升或抑制轉染細胞中的基因表達。因此,轉染是一種功能強大的分析工具,可用于基因或基因產物的功能和調控研究,用于生成轉基因生物,并用作基因治療方法。
轉染 轉化 轉導區(qū)別:
1、作用不同
轉化是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表現型發(fā)生相應變化的現象。
轉導由噬菌體將一個細胞的基因傳遞給另一細胞的過程。
轉染是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。
2、特點不同
轉化是細菌間遺傳物質轉移的多種形式中最早發(fā)現的一種,它不同于通過噬菌體感染傳遞遺傳物質的轉導以及通過細菌細胞的接觸而轉移DNA的細菌接合。
轉導是細菌之間傳遞遺傳物質的方式之一。其具體含義是指一個細胞的DNA或RNA通過病毒載體的感染轉移到另一個細胞中。
轉染關鍵因素都是用氯化鈣處理大腸桿菌細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA分子能夠容易進入細胞內部。
3、功能不同
轉化的研究不但在理論上有重要意義,而且在基因工程中是將質?;虿《据d體引入宿主細胞的一種重要手段。它也可能為育種和遺傳性疾病的基因治療提供新的途徑。
應用轉導是細菌的遺傳學研究中的一種常用研究手段。它可以用來在細菌間轉移基因,進行互補測驗,進行基因定位,特別是通過共轉導方法進行基因的精細結構分析。
轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優(yōu)化DNA與轉染試劑比例,細胞數量,培養(yǎng)及檢測時間等。
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