大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是基因表達(dá)技術(shù)中發(fā)展最早、應(yīng)用最廣且最為經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的經(jīng)典表達(dá)系統(tǒng)。利用該系統(tǒng)表達(dá)重組蛋白具有許多優(yōu)越性:細(xì)胞遺傳背景清楚、目的基因表達(dá)水平高、培養(yǎng)周期短、純化方便、穩(wěn)定性好、抗污染能力強(qiáng)、易于放大和適用于多種屬蛋白的表達(dá)但是仍然存在著表達(dá)量低、蛋白活性低、易形成包涵體和含有內(nèi)毒素等問題。
大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)簡(jiǎn)介:
1. 代謝途徑和基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚
全基因組測(cè)序,共有4405個(gè)開放性閱讀框
2.基因克隆表達(dá)系統(tǒng)成熟完善
繁殖迅速,培養(yǎng)簡(jiǎn)單,操作方便,遺傳穩(wěn)定。
3.培養(yǎng)周期短
大腸桿菌繁殖能力強(qiáng),在營(yíng)養(yǎng)條件充足時(shí),20~30mins即可繁殖一代;大規(guī)模發(fā)酵成本低,具有巨大的生存潛力。
4. 目標(biāo)基因表達(dá)水平高
表達(dá)水平較一般真核表達(dá)系統(tǒng)高,某些外源因在大腸桿菌中的表達(dá)可達(dá)總蛋白的5%~30%。
5. 遺傳背景清楚
對(duì)大腸桿菌的遺傳背景和生理特性研究相當(dāng)清楚,已有多種不同抗藥性、不同營(yíng)養(yǎng)缺陷型和不同校正突變型的菌株供選擇使用。
6.抗污染能力強(qiáng),下游工藝簡(jiǎn)單,易于控制
已有大量可供選擇利用的表達(dá)載體,被美國(guó)FDA批準(zhǔn)為安全的基因工程受體菌。
制備高質(zhì)量、高純度、高天然保真性的蛋白,是許多實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵性的第一步。
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